欧洲肿瘤医学学会（ESMO）的工作组已确定，在免疫治疗中使用检测的顺序应根据特定的肿瘤类型来设定。

意大利维罗纳大学及医院信托基金病理学和诊断学系主任医学博士Aldo Scarpa在2019年ESMO免疫肿瘤大会说到“ MSI（微卫星不稳定性）是用于筛查广泛范围的Lynch综合征[-相关]癌症的诊断检测，也是胃肠道癌症的预后检测和免疫疗法的预测标志。”

MSI是指由于在DNA复制时插入或缺失突变引起的微卫星（Microsatellite, MS）序列长度改变的现象，常由错配修复缺陷(dMMR)引起。MSI是Lynch综合征的特征性分子，也发生在多种癌症中，包括结直肠癌，子宫内膜癌和胃癌。最近研究表明MSI是预测免疫治疗效果的生物标志物，这增加了肿瘤医生在多种类型肿瘤中进行dMMR检测的临床需求。因此，现在迫切需要明确何种情况需要检测以及如何进行最优的检测。

为解决以上问题，ESMO工作组为微卫星不稳定性（MSI）、错配修复缺陷（dMMR）、肿瘤突变负荷（TMB）的定义及与PD-L1表达的关系设立了标准。[3]

MS的定义：是重复的DNA序列，沿着基因组分布在编码区和非编码区，由长度在1到6个碱基的序列重复而成。尽管微卫星在不同的个体之间存在多态性（序列重复的重复数因人而异），但在患者的胚系DNA与肿瘤的体系DNA之间通常长度相同，它们的重复性使得它们特别容易出现DNA错配，这种错误可能发生在DNA复制或医源性损伤中。

DNA MMR的定义：当出现错配错误后（包括单个碱基错配或者短序列的插入/缺失），DNA MMR这种高度保守的机制可以用来重建DNA的完整性。有四个主导蛋白MLH1、MSH2、MSH6、PMS2。MLH1与PMS2形成异源二聚体，MSH2与MSH6形成异源二聚体。这些基因中的某1个通过生殖系或体细胞突变失活，可导致dMMR。

MSI的定义：MSI是由DNA修复蛋白的缺失造成的高度突变的状态。其典型特点是微卫星突变的富集，通常包括重复长度的改变。MSI的存在是MMR不能正常运作的表型证据。

MSI/dMMR肿瘤的定义：dMMR肿瘤是一种发生成千上万的突变的状态，这种突变主要在微卫星中聚集并且包括重复长度的改变、从而导致MSI。因此，MSI是dMMR的标记，是细胞高突变状态的特点。

对于与Lynch综合征相关的癌症，这4种MMR蛋白的免疫组织化学（IHC）是一线检测。对于IHC结果不确定的情况（例如仅有1个异二聚体亚基缺失），需要对特定微卫星位点进行MSI-聚合酶链反应（PCR）分子检测。内部阳性对照（如正常粘膜、淋巴细胞或基质细胞）的存在，对于结果的解读是必需的。IHC的决定性结果包括阳性结果和阴性结果，其中阳性结果表示肿瘤细胞和对照细胞具有可比强度的核染色，阴性结果中对照细胞具有核染色，而肿瘤细胞没有。异常染色时则需要通过MSI-PCR验证，该方法具有更高的特异性和灵敏度。

对于与Lynch综合征无关的癌症，共识小组夸赞了新一代测序方法（NGS）的优势，该技术可以结合MSI和TMB的检测结果（表2 ）。在分析一项来自5930个癌症样本序列数据的研究中，研究人员在18种癌症类型中的14种中发现了MSI-H肿瘤，其发生率从子宫内膜癌的30％到甲状腺癌的<1％。在一项类似的研究中，分析了39种癌症类型，其中有27种检测到MSI，其中大多数是低比例的，只有4种类型的MSI-H频率> 5％。

Scarpa说：“除非我们使用NGS，否则我们无法想象用这些检测来分析所有病例。使用NGS，可以分析几十个基因以获得有关点突变，缺失，扩增和拷贝数变化的信息。”

MSI（字母A表示），TMB（字母B表示）与PD-L1表达（字母C表示）之间的关系。